楊永花

(蘭州市園林科學研究所730070)

垂吊矮牽牛(Petunia?Spreding)為茄科矮牽牛屬的多年生蔓生植物，是近年來較為時尚的垂吊型花卉裝飾植物。目前該品系主要依靠從國外引進F1代種子進行播種繁殖，但種子價格昂貴(單價2.5元/粒)，細小，播種難度大，種子繁殖又易發(fā)生變異，出現(xiàn)雜色，而扦插繁殖苗分枝力弱，株型單薄，嚴重影響其觀賞價值。播種、扦插都難以在短時間內(nèi)生產(chǎn)出批量的優(yōu)質(zhì)種苗。因此，采用組織培養(yǎng)技術(shù)進行快速繁殖，可解決繁殖系數(shù)低、種子價格昂貴等問題，從而滿足市場的大量要求。

　　一、材料與方法

　　1?取材與消毒
　　在日光溫室中選擇生長健壯、無病蟲害植株的幼嫩葉片，作為外植體材料，用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗2～3次，置于超凈工作臺上，先用70%的酒精浸泡10秒鐘，無菌水沖洗一次，再用1‰的升汞消毒5～6分鐘，無菌水沖洗4～5次，待接種。
　　2?培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件(培養(yǎng)基單位mg/L)
　　試驗所選用的培養(yǎng)基為(1)MS+6BA1+NAA0.1；(2)MS+6BA2+NAA0.2；(3)MS+6BA0.5+NAA0.1；(4)MS+KT0.5+NAA0.1；(5)1/2MS；(6)1/2MS+IBA0.1；(7)1/2MS+IBA0.2；(8)1/2MS+NAA0.03。以上培養(yǎng)基中均加入瓊脂3.3g/L，MS中加入白糖30g/L，1/2MS中加入白糖20g/L，pH值均為5.8，培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照強度1500LX～2000LX，光照時間10～12h/d。
　　3?實驗方法
　　將葉片剪成1cm2大小的方塊，接種在培養(yǎng)基(1)和(2)中，誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽的形成。每處理10塊葉片，待外植體萌發(fā)產(chǎn)生密集的不定芽叢后，分割成1cm2大小的方塊，繼代培養(yǎng)在(3)和(4)中，每處理接20塊不定芽叢。培養(yǎng)10天后統(tǒng)計高于2cm的健壯幼苗，并將高于2cm的健壯幼苗剪切下來轉(zhuǎn)接到(5)～(8)中進行生根，每處理接40棵幼苗，培養(yǎng)一周后統(tǒng)計幼苗生根情況。當生根試苗根系生長至1cm以上，苗高4～5cm時進行移栽。

　　二、試驗結(jié)果

　　1?芽誘導(dǎo)分化
　　接種到培養(yǎng)基(2)中的葉片，培養(yǎng)1周后，葉片邊緣開始出現(xiàn)淡綠色愈傷組織，葉片漸變厚并彎曲成拱形狀，2周后愈傷組織上出現(xiàn)綠色突起(即芽點)，3周開始分化，產(chǎn)生密集的叢生芽，誘導(dǎo)率達100%。接種到培養(yǎng)基(1)中的葉片培養(yǎng)10天后，葉片邊緣開始出現(xiàn)淺綠色愈傷組織，葉片加厚，并膨大凸起。3周后愈傷組織上出現(xiàn)稀少的綠色芽點，1個月后開始分化產(chǎn)生叢生芽，誘導(dǎo)率達90%。葉片在培養(yǎng)基(2)中比(1)中分化所需時間短，分化率高，且產(chǎn)生密集的叢生芽。因此，MS+6BA2+NAA0.2更適宜葉片誘導(dǎo)培養(yǎng)。
　　2?芽的增殖繼代
　　繼代于(3)中的葉片不定芽叢培養(yǎng)10天后，每塊不定芽可增殖15～20個高于2cm的幼苗，但幼苗莖桿細弱，需經(jīng)過壯苗培養(yǎng)才能轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進行生根。繼代于(4)中的不定芽叢培養(yǎng)10天后，每塊不定芽均可增殖30～40個高于2cm的幼苗，且幼苗莖桿粗壯，葉片濃綠，生長勢強，可直接轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進行生根。因此，MS+KT0.5+NAA0.1是叢生芽增殖的最佳繼代培養(yǎng)基。
　　3?生根培養(yǎng)
　　健壯幼苗在生根培養(yǎng)基(5)和(6)中，培養(yǎng)5天后開始生根，培養(yǎng)10天后，(5)中幼苗根細弱，每株平均有12條根，部分幼苗葉尖變白，(6)中幼苗根粗壯，平均有20條根，幼苗生長旺盛，(7)中幼苗7天開始生根，根粗短，平均只有9條根，(8)中幼苗8天開始生根，根粗短，平均有16條根，幼苗生長健壯。因此，從開始生根天數(shù)、平均根數(shù)及幼苗生長勢看，1/2MS+IBA0.1為幼苗最佳生根培養(yǎng)基，根多而粗壯。

　　三、煉苗與移栽
　　生根苗根系長至1cm以上，株高4～5cm時即可進行煉苗移栽。移栽前先在自然條件下打開瓶口煉苗2～3天，輕取試管苗，用溫水洗干凈根部粘附的培養(yǎng)基，移栽到新的蛭石基質(zhì)中，用1‰的多菌靈溶液澆濕基質(zhì)，用75%的遮蔭網(wǎng)遮蔭保濕，1周后逐漸通風透光，生長適溫控制在22℃左右。

　　四、小結(jié)與討論
　　1?通過組織培養(yǎng)技術(shù)可快速生產(chǎn)出垂吊矮牽牛幼苗，解決了其種子依靠進口等問題，降低了生產(chǎn)成本，為大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)種苗提供了一條捷徑。生產(chǎn)的植株分植習性好，葉片濃綠，花色鮮艷，花期長。
　　2?在實驗范圍內(nèi)，垂吊矮牽牛葉片誘導(dǎo)愈傷組織形成叢生芽的最佳培養(yǎng)基為MS+6BA2+NAA0.2，最佳增殖繼代培養(yǎng)基為MS+KT0.5+NAA0.1，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1。
　　3?生根試管苗根系長至1cm以上，株高4～5cm時即可煉苗移植，移栽成活率達95%以上。