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花葉絡(luò)石組織培養(yǎng)快繁技術(shù)
1、花葉絡(luò)石簡(jiǎn)介 1．1植物名稱花葉絡(luò)石汗（TraChelospermurnjasmlnoidesF1ame)。絡(luò)石又叫石龍?zhí)伲瑸閵A竹桃科的常綠藤本，長(zhǎng)有氣生根，常攀緣在樹木、巖石、墻上生長(zhǎng)；初夏5月開白色花，形如“萬(wàn)”字，有芳香。花葉絡(luò)石，葉上有白色或乳黃斑點(diǎn)，并帶有紅暈。莖有不明顯皮孔，小枝、葉下面和嫩葉柄被短柔毛，稍老枝葉無毛。葉革質(zhì)，橢圓形至孵狀隨圓形或?qū)挼姑危L(zhǎng)2—6cm，寬1—3cm。老呈近綠色或淡綠色，第一輪新葉紅色，每枝多數(shù)為一對(duì)，少數(shù)2—3對(duì)粉紅葉，第二對(duì)到第三對(duì)為純白色葉，在純白葉與老綠葉間有數(shù)對(duì)花葉，多數(shù)葉脈部分呈白色，葉面配有不規(guī)則白色斑塊，從新葉到老葉白色成份逐漸減少。 1．2栽培范圍絡(luò)石自然分布于我國(guó)東南部，黃河以南地區(qū)均有分布。從目前浙江省的金華、蕭山等地栽與盆栽試驗(yàn)初步分析，野外作為彩葉地被植物、選景植物栽培可以在其原種范圍內(nèi)進(jìn)行。如作為室內(nèi)盆栽觀賞植物，則可用于任何地區(qū)，尤其在光照條件較好的地區(qū)更為適宜。 1．3觀賞價(jià)值與園林應(yīng)用花葉絡(luò)石的觀賞價(jià)值在于其三個(gè)層次的葉色，由紅、粉紅、純白和花白、綠葉所構(gòu)成的色彩群，極似盛開的一束花朵，極其艷麗、多彩。因?qū)傩氯~的色彩而非花色，其觀賞期一年四季，尤其是春、夏、秋三季，相對(duì)來說冬季因不長(zhǎng)新葉，觀賞效果要差一些。為達(dá)到最佳的色彩效果，需要通過強(qiáng)度修剪以促進(jìn)萌枝，形成緊密型植株叢，促進(jìn)新葉生長(zhǎng)。在園林上，它是極其美麗的地被植物，可以作為常年“開花”植物用于各種花徑布置；同時(shí)它又是優(yōu)良的盆栽植物材料，可以代替目前公園、現(xiàn)代設(shè)施上盆花布景，以克服盆花觀賞期短、經(jīng)常換用的高成本缺點(diǎn)。此外，也是可用作家庭盆栽的優(yōu)良植物 1．4繁殖花葉絡(luò)石引種成活率達(dá)65%，經(jīng)試驗(yàn)繁殖發(fā)現(xiàn)，花葉絡(luò)石可以在一年中任何季節(jié)扦插繁殖，春季與秋季的生根率均可達(dá)80%以上，夏季扦插對(duì)于部分生長(zhǎng)太嫩的枝條易腐爛，但達(dá)到半木質(zhì)化的枝條均可生根成活。但是通過營(yíng)養(yǎng)繁殖的方式經(jīng)多代繁育后，容易出現(xiàn)葉色退化，種苗顏色不穩(wěn)定；通過組織培養(yǎng)法繁殖花葉絡(luò)石技術(shù)，組培過程中即可出現(xiàn)花葉，遺傳性狀穩(wěn)定。 2、材料類別當(dāng)年生新梢。 3、培養(yǎng)條件基本培養(yǎng)基為HS。(1)誘導(dǎo)休眠芽萌動(dòng)培養(yǎng)基MS+NAA0．05mg/L-1(單位下同)+6-BA2．0；(2)芽增殖培養(yǎng)基：MS+IAA0．2+6-BA1．5；(3)：隆苗培養(yǎng)基：MS+NAA0．5+6-BA0．5；(4)生根培養(yǎng)基：l／2MS+NAA0．5+IBA0．2。以上培養(yǎng)基均附加20g/L-1蔗糖、7g兒-1瓊脂，PH6．0-6．2；光照度為2000～2500lx，每天光照14h；培養(yǎng)溫度白天為25～30℃，夜間為15—20℃。 4、生長(zhǎng)與分化情況 4．1無菌材料的獲得選取一年生幼苗生長(zhǎng)健；仕無病蟲害的母株，切取當(dāng)年萌發(fā)之春梢先端，去除葉片，保留葉柄，將枝條截成2—3cm的小段。消毒時(shí)先用10％洗衣粉溶液浸泡15min，然后用流水；中洗30min。在無菌條件下用75％乙醇溶液浸泡殺菌30S，用0．1％的升汞溶液加吐溫—20殺菌3、5、10、15min。0．1％升汞溶液滅菌效果隨殺菌時(shí)間延長(zhǎng)而提高，殺菌時(shí)間少于10min則無菌苗獲得率小于13．5％，殺菌15min”無菌苗獲得率為23．7％，外植體死亡率達(dá)33．3％。隨著殺菌時(shí)間的延長(zhǎng)升汞對(duì)植物材料的毒害作用加劇，以0．1％升汞溶液殺菌時(shí)間10—15min為宜。用無菌水；中洗3—5遍后，接種到MS固體培養(yǎng)基上。 4．2芽的誘導(dǎo)將接種后20d的無菌苗轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基(1)上，5—7d莖尖開始萌動(dòng)，10d腋芽萌動(dòng)，芽逐漸長(zhǎng)大，繼續(xù)培養(yǎng)20d，莖段上所有腋芽均萌發(fā)成側(cè)枝。側(cè)枝生長(zhǎng)正常，葉片深綠色，莖基部愈傷組織較少，黃綠色。 4．3試管苗的增殖將試管苗側(cè)枝分割成2—3芽為一段，接種于培養(yǎng)基(2)上。10d后莖段葉芽萌動(dòng)，30d長(zhǎng)成大量側(cè)枝，并有大量雙生枝和三生枝產(chǎn)生。接種莖段形成具有5—8側(cè)枝的叢生苗，平均增殖5．8倍。試管苗節(jié)間明顯伸長(zhǎng)，幼嫩葉片莖桿均呈淡紅色，葉片大，莖桿較粗，組織不充實(shí)，莖基部愈傷組織大。以后每30d繼代1次，經(jīng)3—4次繼代試管苗出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。 4．4壯苗培養(yǎng)將經(jīng)增殖培養(yǎng)的試管苗每繼代3—4次后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基(3)上。40d后形成大量側(cè)枝，平均每莖段4—6側(cè)枝，側(cè)枝平均長(zhǎng)1．8cm，平均增殖3．1倍。基本無雙生枝或三生枝。側(cè)枝生長(zhǎng)健；D，組織充實(shí)，葉色深綠，基部愈傷組織小，黃綠色，無玻璃化現(xiàn)象。 4．5根的誘導(dǎo)將生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)度大于1．2cm的側(cè)枝分割，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基(4)上。提高光照度至2500—3000lx，延長(zhǎng)光照時(shí)間至每天16h。培養(yǎng)15d后開始有根原基形成，根原基形成后即可煉苗。20—25d調(diào)查生根情況，生根率73％，每苗平均生根l—2條。 4．6煉苗移栽將生根試管苗帶瓶移人栽培溫室，培養(yǎng)1周。當(dāng)根長(zhǎng)0．5—1omb寸，打開瓶蓋煉苗3—5d，將生根苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，栽植于育苗穴盤中。以黑泥碳為基質(zhì)，溫度控制在20—25℃之間，濕度為85％—95％左右，20d即可成活，成活率達(dá)73％以上
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