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無菌外植體的建立
外植體的選擇與滅菌是植物組培快繁中的重要環節，它由原培養材料、滅菌劑、滅菌方法等因素決定，尋找快速、高效的滅菌方法，減少污染瓶的丟棄，對于降低成本具有重要的意義。 1、方法對成功率的影響 大量的試驗證明，0.1%的升汞是最理想的殺菌劑，但滅菌時間要求極為嚴格。時間過短，殺菌不徹底，時間過長，會對組織細胞有殺傷作用，不利于外植體誘導分化。在殺菌方式的比較試驗中看出，不同的清洗方式對外植體的殺傷率和成活率影響極大，通過磁棒攪動沖洗能夠加大對升汞殘留的沖洗，減少對材料的殺傷作用，降低褐化率，提高成功率。 2、外植體的幼嫩程度、滅菌條件對其成活率的影響 外植體的幼嫩程度不同，其含菌量也不同，所需的滅菌條件也有差異。從酒精濃度、0.1%升汞滅菌時間兩個方面進行試驗，結果表明：幼嫩的外植體材料（如幼葉、幼芽、幼莖段）幼嫩的材料比老材料帶菌量少，不僅所需0.1%的升汞的滅菌時間短，在7-9分鐘之間能達到滅菌效果，而且酒精可用50%來代替70%，酒精濃度的降低，可以減少對材料的傷害，不降低其粘著效能，有利于升汞的殺菌作用，提高外植體的成活率。老的材料（如半木質化、木質化的莖段）莖段內生菌較多，皮部粗糙，所需0.1%升汞滅菌的時間就長（在9-12分鐘之間），且必需用70%的酒精，才能起到較好的滅菌效果。根據不同接種材料，采用不同的措施，就會減少不必要的失敗和投資經費，提高成功率。 3、不同品種外植體及取材季節對成活率的影響 在接種外植體時，有的材料易發生褐變現象，它的產生可分為兩種形式：一種是由于細胞受脅迫條件等不利條件影響所造成的死亡或自然發生的細胞死亡而引起的；另一種是材料傷口處分泌出的酚類化合物引起的，前者可以通過采取適當的措施或者愈傷組織適應了脅迫環境就不再發生褐變，而后者很難清除，嚴重影響外植體的誘導分化。只有選擇合理的外植體，才能降低褐變現象，大部分易褐變的材料，從11月份到第二年2月份褐變率很低，隨著進入生長季節，褐變率逐漸上升，在5、6、7、8月份達到最高峰，然后自9月份后褐變率逐漸下降直到不再發生，為此對易褐變的外植體應在11月到2月取材，通過培養箱內水培催芽取幼嫩部分，或待接種材料放入溫室內，保持半木質化，可獲得理想的原始培養材料。 外植體所帶菌的種類、數量與材料種類和取材季節有關，同時，材料成活率的高低與材料取材的時間及材料本身特性也有關。試驗表明，上年11月份到下年4月份取材最好，4月份到6月份與9月份到11月份取材較好，6月份到9月份較差。試驗中污染若以細菌為主則成功率高,如平邑甜茶、月季、櫻桃、楊樹等；以真菌為主則成功率低，如冬棗、花椒、茶樹等；一品紅由于本身分泌白色乳狀物，滅菌較困難成功率亦較低。因此選擇適宜的基因型材料，適時接種，可大大提高成功率，減少投資損失。
編輯：Aggie |
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