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組織培養(yǎng)工廠及實(shí)驗(yàn)室的安全管理
[日期：2008-07-23] 來源：中國組培網(wǎng) 作者： 發(fā)表評(píng)論(1)打印
在組培工廠生產(chǎn)管理和植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室管理中，安全管理應(yīng)該是放在第一位的。組培工廠和植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)通常包括培養(yǎng)基的配制和消毒、外植體的采集和表面消毒、接種和培養(yǎng)等。在這些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)步驟中，如果不注重安全管理，經(jīng)常會(huì)發(fā)生一些事故，輕則造成財(cái)產(chǎn)損失，重則危及生命。以下根據(jù)筆者多年的教學(xué)、科研和生產(chǎn)工作經(jīng)驗(yàn)，談?wù)勚步M培工廠和植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中幾種主要危險(xiǎn)源及其注意事項(xiàng)。 1、高溫高壓滅菌鍋 高溫高壓滅菌鍋是影響組培工廠及植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室安全最重要的設(shè)備，其日常維護(hù)應(yīng)做到位，日常使用必須嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行。滅菌器的使用應(yīng)由經(jīng)培訓(xùn)合格的人員操作，整個(gè)滅菌過程應(yīng)由專人看管。尤其值得注意的是，每周在夾層有壓力時(shí)拉動(dòng)安全閥手柄數(shù)次，以確保安全閥工作正常，以防蒸汽壓力超過額定壓力，使鍋體爆炸破裂；滅菌完成后，必須關(guān)閉電源，放完鍋內(nèi)的蒸汽，使壓力下降為零時(shí)開啟鍋門，切忌強(qiáng)行開門，以防高壓蒸汽對(duì)人體和設(shè)備造成危害。連續(xù)使用時(shí)間應(yīng)小于8小時(shí)／每天，使用一年之后，每年要請(qǐng)有資格的檢測部門做一次全面系統(tǒng)的檢查，超過使用壽命后應(yīng)該及時(shí)報(bào)廢。 2、用于實(shí)驗(yàn)室消毒的消毒劑 用于實(shí)驗(yàn)室消毒的常規(guī)消毒劑包括紫外線、甲醛和高錳酸鉀、新潔爾滅（苯所溴銨溶液）等。 2.1 紫外線 紫外線波長在100～400 nm之間。紫外線之所以能夠滅菌，是由于它能引起細(xì)菌或病毒的遺傳物質(zhì)DNA和RNA的結(jié)構(gòu)變化，包括堿基損傷如丟失與改變、單鏈或雙鏈斷裂與交聯(lián)及各種光產(chǎn)物的形成等，從而影響DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的翻譯，導(dǎo)致病菌或病毒死亡。另外，紫外線輻射所產(chǎn)生的臭氧和各種自由基可損傷蛋白質(zhì)和酶分子，導(dǎo)致功能改變。因此，紫外線與生物物質(zhì)的作用是通過DNA生物分子等對(duì)紫外線直接吸收導(dǎo)致DNA損傷的直接作用，以及被某些色素吸收導(dǎo)致活性氧產(chǎn)生，與周圍DNA、蛋白質(zhì)、酶、細(xì)胞膜等生物分子反應(yīng)的間接作用進(jìn)行的。紫外線不僅對(duì)微生物有致命影響，對(duì)人也有一定的致癌作用。 因此，當(dāng)植物組織培養(yǎng)或細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室在用紫外線消毒期間，工作人員不要處在正消毒的空間內(nèi)，更不要用眼睛注視紫外燈，也要避免手長時(shí)間在開著紫外燈的超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行操作。一般在接種室用紫外線消毒后，不要立即進(jìn)入接種室，此時(shí)室內(nèi)充滿高濃度的臭氧，會(huì)對(duì)人體，尤其是呼吸系統(tǒng)造成傷害。應(yīng)在關(guān)閉紫外線燈15～20分鐘后再進(jìn)入室內(nèi)。 2.2甲醛和高錳酸鉀 植物組織培養(yǎng)或細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常采用甲醛溶液和高錳酸鉀按2比1的比例進(jìn)行薰蒸消毒。產(chǎn)生甲醛是一種無色但有強(qiáng)烈刺激性的氣體，可與菌體蛋白中的氨基結(jié)合使其變性或使蛋白質(zhì)分子烷基化，對(duì)細(xì)菌、芽胞、真菌、病毒均有效。甲醛通常在水中保存，即甲醛水溶液（福爾馬林）。甲醛對(duì)眼睛、嗅覺和呼吸道有強(qiáng)烈的刺激作用，引起的癥狀主要有流淚、打噴嚏、咳嗽，甚至出現(xiàn)結(jié)膜炎、咽喉炎、支氣管痙攣等，還可引起類似過敏性哮喘癥。人對(duì)甲醛十分敏感，空氣中游離甲醛含量達(dá)到0.1 mg/m3時(shí)，人的眼、鼻、喉就難以忍受。甲醛在人體內(nèi)會(huì)分解出甲醇，吸入一定量就會(huì)引起人體某種程度的中毒，如麻痹中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使人感到疲勞。甲醛還會(huì)損害視網(wǎng)膜，使視力減退并有頭痛癥狀。甲醛與人體中的蛋白質(zhì)反應(yīng)會(huì)形成對(duì)人體有害的不溶（融）物質(zhì)，會(huì)使皮膚失去彈性。甲醛還可能腐蝕肝臟。甲醛甚至還是一種致癌物。 因此，在實(shí)驗(yàn)室用甲醛和高錳酸鉀封閉消毒期間，不宜進(jìn)入消毒空間。消毒后通風(fēng)換氣，等氣味散盡后再出入。 2.3 新潔爾滅（苯所溴銨溶液） 新潔爾滅（苯所溴銨溶液）為溴化二甲芐基烷銨，是一種表面活性劑。這類消毒劑可吸咐在細(xì)菌的表面，從而改變細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的通透性，使菌體內(nèi)的酶、輔酶和代謝產(chǎn)物漏，妨礙細(xì)菌的呼吸及糖酵解過程，并使菌體蛋白變性[4]。此類消毒劑具有殺菌力強(qiáng)，無刺激性、腐蝕性及漂白性，易溶于水，不污染物等特點(diǎn)。在酸性、中性介質(zhì)中殺菌力強(qiáng)，但在酸性介質(zhì)中大減。對(duì)結(jié)核桿菌、綠膿桿菌、芽胞、真菌和病毒效用差，甚至無效。 新潔爾滅由于對(duì)人體毒性較小，只要在噴灑消毒時(shí)，戴好手套和口罩即可。 3、用于外植體表面消毒的消毒劑 用于外植體表面消毒的消毒劑次氯酸鹽、過氧化氫、溴水、氯化汞、酒精等。其中次氯酸鹽和氯化汞在使用過程中容易造成事故。 3.1 次氯酸鹽 次氯酸鹽是一種強(qiáng)氧化劑，主要有次氯酸鈉、次氯酸鈣（又名漂白粉）兩種。由于次氯酸鈣在空所中易吸水潮解，降低滅菌效力，所以更為常用的是次氯酸鈉。次氯酸鈉通常為微黃色或無色液體，有效氯約為5%。其滅菌原理是由于次氯酸鹽在水中形成次亞氯酸（HClO），次亞氯酸分解成鹽酸和新生態(tài)氧（HClO→HCl + [O-]），[O-]有極強(qiáng)的氧化性，能氧化細(xì)菌體內(nèi)原漿蛋白中的活性基團(tuán)，并與蛋白中的氨基結(jié)合而使其變性，因而起到殺菌作用。這種消毒劑殺菌作用強(qiáng)，對(duì)細(xì)菌、真菌、芽胞及病毒都有效。雖然次氯酸鈉最后分解為氯氣和氧氣而散逸，因而易于除去，不留殘毒，但產(chǎn)生的刺激性氣體如氯氣和氯化氫卻對(duì)人體有毒害作用。這些氣體強(qiáng)烈刺激眼角膜、上呼吸道粘膜等，可引起喉痙孿、喉水腫、支氣管炎和急性腦炎等，重者會(huì)致人窒息死亡。 由于超凈工作臺(tái)上存在面向人體的較強(qiáng)的風(fēng)力，在使用這種易揮發(fā)的表面消毒劑對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：（1）采用封閉的容器對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒；（2）消毒工作完成后應(yīng)將消毒廢液及時(shí)倒掉，清理好工作臺(tái)后開始下一步工作。（3）在進(jìn)行表面消毒操作時(shí)戴好口罩，不宜用手揉眼摸臉等動(dòng)作，以防消毒液對(duì)眼睛和皮膚造成傷害。 3.2 氯化汞 氯化汞（HgCl2）是一種重金屬鹽類，Hg2+可與帶負(fù)電的細(xì)菌蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白變性，酶蛋白失活。氯化汞是一種極強(qiáng)的殺菌劑，但主要對(duì)細(xì)菌和真菌有效，對(duì)芽胞、病毒的效力差，甚至無效。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人在無機(jī)汞中毒后，Hg2+可與體液中的陰離子結(jié)合后，形成可擴(kuò)散的型分子，隨血液循環(huán)進(jìn)入各組織器官，造成內(nèi)臟器官組織細(xì)胞受損，器官功能失調(diào)，從面造成整個(gè)有機(jī)體代謝失控，表現(xiàn)出各種中毒癥狀如腹瀉、排泄量增加、攝食減少、運(yùn)動(dòng)遲緩、肝臟各分葉粘連、腎臟水腫、胃腸及腹壁粘連隊(duì)等，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致死亡。 氯化汞是一種極為有效的殺菌劑，但也是一種劇毒藥品，因而在實(shí)驗(yàn)室管理中應(yīng)采取以下嚴(yán)格的方法：（1）氯化汞應(yīng)由至少兩名實(shí)驗(yàn)管理人員或教師共同掌管，每次進(jìn)貨入庫及使用時(shí)要登記詳細(xì)，防止私人帶出實(shí)驗(yàn)室；（2）采用專門的藥匙、燒杯、量簡來配制，稱量后的墊在天平盤上的紙應(yīng)及時(shí)清除，配制完后要清洗干凈玻璃器皿和手；（3）在消毒操作過程中應(yīng)小心謹(jǐn)慎，避免接觸皮膚，更不能在攪拌或振蕩消毒液時(shí)濺入五官；（4）消毒完成后應(yīng)及時(shí)倒掉消毒廢液。 4、火險(xiǎn) 火災(zāi)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的威脅最大，一旦發(fā)生，將可能給實(shí)驗(yàn)室的人員和財(cái)產(chǎn)造成嚴(yán)重的損失。植物組織培養(yǎng)全過程幾乎都離不開電，因而由于電器設(shè)備引起的火險(xiǎn)必須相當(dāng)注意。這種危險(xiǎn)可能來自于電源、開關(guān)、電路線年久失修，也可能是保險(xiǎn)絲失靈等原因所致。因此應(yīng)定期檢查實(shí)驗(yàn)室的線路，確保萬無一失。 另外，植物組織培養(yǎng)中的接種器械如鑷子、解剖刀、手術(shù)剪等的消毒主要采用酒精擦拭或浸泡后在酒精燈上燒烤的方法進(jìn)行，所以在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行無菌操作時(shí)也應(yīng)格外注意，接種器械燒烤時(shí)應(yīng)遠(yuǎn)離裝酒精的容器，更不能剛剛燒完就插入裝酒精的容器中，也要避免不小心將酒精容器或酒精燈碰倒后引起失火。另外，在酒精燈點(diǎn)燃后，不宜用酒精溶液噴灑超凈工作臺(tái)。 在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)裝備有滅火器、消防火栓等常規(guī)防火設(shè)備。 總之，在學(xué)生或工作人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前進(jìn)行正確操作和安全管理知識(shí)的教育是關(guān)鍵，只有使操作者具有一定的安全意識(shí)和安全管理知識(shí)，才能保證上述危險(xiǎn)源不會(huì)釀成真正現(xiàn)實(shí)的危險(xiǎn)。
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